抗体

当客户想要使用自己的 Fc 区序列（IgG3、小鼠 IgG 或修饰的Fc）或需要表达其他类型的 Fc 融合抗体时，可以选择使用 pTwist CMV BG WPRE Neo 表达载体。

请记得在编码序列末尾加入终止密码子。如果您有任何设计方面的问题，请发送电子邮件至 igg@twistbioscience.com，我们将为您提供定制服务

对于用于抗体生产的合成克隆基因，Twist 提供克隆基因甘油储备液。在抗体生产过程中，DNA 因转染而消耗；但是，甘油储备液保存 DNA 可与生产的抗体一同交付。请参阅从甘油储备液中制备新鲜 DNA 的方案。

请确保序列格式如下所示，以便上传可变区域：

• 去除信号头肽（如果使用 pTwist 载体 + Twist 推荐信号头肽）
• 可变区域不应以任何 CH1 起始序列结束
• 如果您的 ORF 与您的插入位点一致，序列可以分为三个

您可以使用 A 蛋白或 G 蛋白固相进行纯化，两者可与抗体的 FC 区域结合，具体取决于 IgG 的种类和同种型。或者，您可以使用固定化抗原（全长或短肽抗原）来纯化抗体。该方法将取决于抗体的下游应用及特异性。

前导或分泌信号序列在翻译过程的早期充当细胞机器结合的肽信号。这有助于将翻译复合物正确定位到内质网，在内质网中抗体链可以进入分泌通路以进行蛋白质组装和细胞分泌。前导序列在蛋白质组装过程中会被切割，因此不构成最终蛋白质。在使用我们的 pTwist IgG 表达载体时，Twist 建议重链和轻链使用以下前导序列，因为这些序列已在 Expi293™ 和 ExpiCHO™ 细胞系中使用我们的 pTwist 载体进行了测试和验证：

VH：MRAWIFFLLCLAGRALA

VL：MRAWIFFLLCLAGRALA

Kozak 序列将起始前复合体 (PIC) 和核糖体引导到翻译起始位点（起始密码子），并介导核糖体组装，确保对正确的蛋白质序列进行翻译。

共有 Kozak 序列通常被认为是 GCCGCCACCATGG，其中 ATG 是起始密码子（通常是信号序列的起始）。Twist 推荐使用起始密码子 ATG 上游的 GCCGCCACC 版本。

您可以单击此处，在您的账户中找到我们定制抗体产品的定价表。

如果您需要联系客户经理了解定价事宜，可以在电子商务中的“账户”下找到其联系信息。

Twist 使用的是行业标准细胞系 Thermo Scientific Expi293™ 和 Thermo Scientific ExpiCHO™

研究表明，一旦 IgG 进入循环，重链的 C 末端赖氨酸残基（存在于所有 IgG 同种型上）就会被切割掉。研究还表明，赖氨酸一旦被切割掉就不会对相关功能产生影响，而且它的存在实际上会抑制抗体充分发挥细胞毒性的潜力：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

这种全长 IgG 中的半胱氨酸与 LC 恒定区形成二硫键，而 VHH-Fc 融合构建体中不存在。

Twist 在还原条件下检测每种抗体产品的产量 (µg)、纯度 (%) 和大小 (kDa)。每个抗体将通过 LabChip (CE-SDS) 进行检测，以测定单个重链和轻链的纯度和大小。产量根据 A280 读数进行定量。上清液样本使用滴度测定法进行定量。在最终文件中，除了纯度百分比、重链和轻链大小外，还会报告每个纯化抗体的体积、产量和浓度值。上清液记录文件中将提供抗体滴度表达水平，包含低、中或高三个表达水平。

我们使用市售的 PBS，请根据要求与客户共享产品样本信息：

• PBS 7.4 目录号 21-031-CM，Corning
• PBS 6.0 目录号 P1760，Teknova

• 96 深孔板 - 可提供定制孔板
• 1.4 mL 微型管架
• 2 mL 管
• 4 mL 管
• 10 mL 管（仅适用于 8 mL 上清液）

1 mL = ~220 uL 体积，15-300 µg

8 mL = ~750 uL 体积，15-3000 µg