多重分析基因片段

There are no complexity requirements for MGF. 不过，有些功能可能会导致效果不理想：

1. 所有变体共有的直接重复序列和保守序列等特征可能会在扩增过程中导致一些重组。
2. 长的同源多聚物（> 20 bp）可能会导致扩增过程中出现一些脱落。
3. 强发夹可能会导致扩增效果不佳，从而导致这些变体的代表性不足或丢失。

否，池中的所有片段必须具有相同的侧翼序列。可通过订购多个池来实现多套侧翼。或者，您也可以设计一个内部侧翼不同、外部侧翼通用的单一池，供 Twist 用于扩增。然后，您可以扩增出子库；不过，这样做有可能导致均匀性偏差和/或模板材料耗尽。

否，我们可仅合成含有四个标准碱基——即 A、C、G 和 T 的序列。不允许使用简并碱基 (R、Y、S、W、K、M、B、D、H、V、N)。然而，如果您希望一个片段中的所有四个碱基（或碱基子集）位于给定的位置，您可以设计单独的片段，每个片段在目的位点都有不同的碱基。

是的，我们可以为您的片段添加可用于限制性克隆的标准 Twist 侧翼。

第 1 步：下载 MGF 提交表并填写表格中的所有字段，以便进行您的 MGF 设计。

第 2 步：点击此处上传完成的提交表格。

如果您有任何疑问或问题，请通过电子邮箱 (customersupport@twistbioscience.com) 或其他沟通方式联系我们。

请考虑引物设计的标准规则：

1. 长度 20-25 bp
2. G/C 含量：35-70%
3. 熔化温度（Tm）为 55-60°C
4. 引物对的 Tm 值应相差 5°C 以内
5. 引物对不应有互补区
6. 避免可变区中的内部引物结合位点

1. 片段长度可在 301-500 nt 之间（包括恒定侧翼）。
2. 片段的总长度不能超过 500 个核苷酸，包括用于 PCR 扩增的恒定侧翼。侧翼序列的长度必须至少为 20-25 bp，这将允许多达 460 bp 的可变编码区。
3. 从最短到最长的片段长度变化不应超过 80 bp（例如，如果最长的片段为 400 bp，则最短的片段应 > 320 bp）。

多基因片段库的交付时间为 8-12 个工作日。

定价取决于复杂性级别（池尺寸）和片段长度级别（301-350 nt、351-400 nt、401-450 nt 和 451-500 nt）。

1. 对最终样本池进行毛细管电泳，以确定样本的纯度。池中至少有 90% 的分子必须在预期长度范围内。
2. 对最终样本进行荧光定量，以确保至少有 200 ng 的材料。
3. Twist 不会对样本池进行任何测序，也不保证样本的代表性或错误率质量。不过，我们在开发过程中发现，大多数样本池的 90/10 百分位数小于 3，平均错误率约为 1:2,000。

Twist 使用亚磷酰胺法来合成片段。与传统基于色谱柱的合成仪相比，我们的合成平台简化了合成过程，从而缩小了合成所需的空间并提高了产量。这一工艺经过多年优化，现在 Twist 可以打印出长度达 500 个核苷酸的池。合成后，我们采用优化的扩增工作流程，以 dsDNA 格式生成多基因片段库。

Twist 的多基因片段库 (MGF) 提供了一种独特的集合格式，可处理多达数十万个长度在 301 至 500 bp 之间的双链 DNA 基因片段。这种片段汇集格式可实现高通量筛选应用，如先导编辑、基于 CRISPR 的超复杂功能筛选、多肽和蛋白质工程、Ab 研发和大规模并行报告检测 (MPRA)，在这些应用中，每个片段的成本可能会成为所需变体数量的障碍。

Twist 采用优化的扩增工作流程，以 dsDNA 格式生成多基因片段库，从而降低了扩增结果不佳的风险，因为对合成材料进行 PCR 扩增非常具有挑战性。

多基因片段库以扩增的双链 DNA 形式提供，作为冻干产品汇集在一个试管中

1. 未修饰的多基因片段库是稳定的。若需长期储存（长达一年），将 DNA 冷冻储存于 -20°C。若需储存更长的时间，则冷冻储存于 -80°C。
2. 如果将片段储存在溶液中，请避免反复冻融，否则可能会导致片段发生物理降解。
3. 如果计划进行大量的实验，请将样本分装，并在 -20°C 下储存。
4. 建议小心处理，避免核酸酶或细菌可能造成的污染。

重悬指南：

• 重悬时，在打开试管之前进行短暂离心，并在 pH 8.0 的无核酸酶 Tris-EDTA (TE) 缓冲液或 pH 8.0 的 10 mM Tris-HCl 中重悬至所需浓度。
• 建议使用浓度至少为 10 ng/μL 原液稀释液，但最佳浓度需要根据您所需的应用来确定。
• 制备分装的原液稀释液以及工作溶液，以降低污染的发生几率并减少冻融的次数。制备完成后应尽快使用工作溶液，并尽量减少高温暴露。

重悬的 DNA

• 根据储存条件的不同，Twist 建议重悬后 DNA 的储存期限如下。
  • 室温时，可储存 3 个月。
  • 4°C 时，可储存 12 个月。
  • -20°C 时，可储存 24 个月。
  • -80°C 时，可长期储存。

Twist Bioscience ships Multiplexed Gene Fragments dried down in tubes at ambient temperature. 双链 DNA 在大多数标准实验室储存条件下都很稳定。但是，为了保持 Twist Bioscience 合成 DNA 的高品质，遵循以下最佳实践十分重要。

• Twist 建议根据存储条件，遵循以下干燥的 DNA存储期限。
  • 室温时，可储存 3 个月。
  • 4°C 时，可储存 12 个月。
  • -20°C 时，可储存 24 个月。
  • -80°C 时，可长期储存。